克唑替尼使IHC ALK阳性FISH阴性肺癌患者获益

间变性淋巴瘤激酶（ALK）基因重排是肺癌的驱动基因之一。克唑替尼（Crizotinib、Crizonix、赛可瑞、Xalkori）是一种靶向间变性淋巴瘤激酶（ALK）的药物，已被批准用于治疗ALK突变的非小细胞肺癌（NSCLC）患者的一线治疗。

目前常用于检测ALK突变的方法包括荧光原位杂交（FISH）、全自动免疫组化（IHC Ventana ALK D5F3）、荧光定量PCR（RT-PCR）。

尽管IHC，FISH等ALK状态检测方法有很高的一致性，但几乎所有研究都发现ALK不同方法检测结果存在差异。因此，当不同方法之间ALK状态的差异时，可能会让人感到困惑。为了进一步解决这个问题，研究人员收集了来自北京3家医院6名肺腺癌患者的数据，这些患者经Ventana IHC检测ALK（D5F3）阳性，FISH阴性，在克唑替尼治疗后对这些患者进行了临床评估。

患者临床病理特征

该研究中6名患者的临床病理学特征显示在上表中。患者的中位年龄为54岁（范围31-69岁），ECOG体力状态（PS）评分中位数为0（范围0~2）。所有患者在开始克唑替尼治疗时疾病分期均为IV期，所有肿瘤都属于没有出现EGFR/KRAS突变的腺癌。2名患者接受克唑替尼作为一线治疗，而4名患者在克唑替尼开始前接受过多种治疗。克唑替尼治疗的中位持续时间为9.71个月，并且在最后一次随访时仍有5名患者仍在接受克唑替尼治疗。

在最后随访时，仍在接受治疗的5名患者（患者1-5）中未观察到疾病进展。在治疗>3个月后，1名患者（患者6）突然死亡（由于肺栓塞或心源性猝死）。

对克唑替尼治疗的反应

肿瘤对克唑替尼治疗的反应如上图所示。有4名患者部分反应，2名患者病情稳定。因此，克唑替尼的客观反应率为66.7％。在1名患者中，检测出新的融合变（EML4->EXOC6B->ALK融合体）（参见下文），患者出现部分反应。

克唑替尼治疗期间未观察到4级或5级不良事件。1名患者的QT延长导致暂停治疗和减少剂量，但没有患者需要永久停用该药物。

IHC染色

所有6个样本通过IHC染色鉴定均为CK7、TTF-1和napsin A表达阳性。其中一个细胞学样本显示P63和TTF-1共表达，其他5个为P63阴性。样本中肿瘤细胞的比例显示在上表中。

FISH检测ALK重排

通过FISH检测来自6名患者的所有细胞学和组织学样本。ALK阳性细胞核的百分比均低于15％（范围，6％至12％）。3位病理学专家对FISH测试结果的解读一致。

Ventana IHC（D5F3）检测ALK蛋白表达

所有6名患者的组织学和细胞学样本进行了Ventana IHC（D5F3）ALK蛋白表达分析。没有观察到异质性肿瘤ALK表达。3位病理学专家对ALK阳性结果的解读一致。

qRT-PCR检测EML4-ALK融合

通过实时逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）技术在3个样本[1个组织学样本（患者1）和2个细胞学样本（患者2和6）]中进一步验证EML4-ALK融合。

RNAscope ISH ALK基因RNA分析

ALK基因RNA重排的RNAscope原位杂交（ISH）结果表明，患者1的Hs-ALK-E1-E18得分为1，Hs-ALK-19-E29-20p得分为2，患者6的a Hs-ALK-E1-E18的评分为0，Hs-ALK-19-E29-20p评分为2。

高通量测序（NGS）

在患者1肿瘤组织710个DNA拷贝中检测出了三个EML4->EXOC6B->ALK融合的DNA模板。融合率仅为0.42％（3/710）。与人类基因组（hg19）比对，3个融合DNA拷贝由3个基因片段EML4，EXOC6B和ALK组成。复杂的融合类型和低融合率导致了FISH的阴性结果。

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