四氢叶酸是在体内合成嘌呤核苷酸和嘧啶脱氧核苷酸的重要辅酶，本品作为一种叶酸还原酶抑制剂，主要抑制二氢叶酸还原酶而使二氢叶酸不能还原成有生理活性的四氢叶酸，从而使嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸的生物合成过程中一碳基团的转移作用受阻，导致DNA的生物合成受到抑制。

本品也有对胸腺核苷酸合成酶的抑制作用，但抑制RNA与蛋白质合成的作用则较弱，本品主要作用于细胞周期的S期，属细胞周期特异性药物，对G1/S期的细胞也有延缓作用，对G1期细胞的作用较弱。

最初使用甲氨蝶呤或与类固醇合用的甲氨蝶呤用于诱导急性淋巴细胞白血病的缓解。最近，皮质类固醇疗法与其他抗白血病药物联合使用或与甲氨蝶呤(包括甲氨蝶呤)循环联合使用，已显示出快速有效的缓解作用。当用于诱导时，每天给予3.3mg/m2甲氨蝶呤与60mg/m2泼尼松合用，通常在4至6周内可使50%的患者缓解。

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